Protocolo nuevo de análisis simplificado, rápido, para la COVID-19 requiere menos mano de obra, conocimiento y equipos

El protocolo utiliza TRIzol (tiocianato de guanidinio/fenol-cloroformo) para purificar el ARN viral de diferentes tipos de muestras clínicas, requiere precauciones mínimas de nivel de bioseguridad y, dada su alta sensibilidad, puede adaptarse fácilmente a estrategias de mezcla de muestras. Usando este protocolo simplificado, las muestras se eluyen en TRIzol inmediatamente después de la recolección y se extrae el ARN. Los resultados han demostrado que este protocolo es tan eficiente, si no más, que las microcolumnas de purificación de ARN basadas en membranas de sílice aprobadas por los CDC para aislar pequeñas cantidades de ARN viral y celular de múltiples tipos de muestras (hisopos nasales y faríngeos y saliva).

Con este método nuevo, las muestras se mezclan y analizan inicialmente; luego, las mezclas positivas se vuelven a analizar individualmente. Esta solución relativamente simple disminuye los recursos de análisis utilizados, pero da como resultado una pérdida de sensibilidad al diluir muestras positivas de pacientes con muestras negativas, de ahí la necesidad de pruebas altamente sensibles que utilicen materiales biológicos, como saliva, que se pueden obtener en cantidades mayores y pueden conservarse fácilmente para volver a realizar la prueba. El protocolo utiliza reactivos químicos comunes que se encuentran en abundancia y pueden aislar ARN de alta calidad que se puede utilizar para múltiples ensayos y proyectos de secuenciación de ARN. Además, las muestras en TRIzol se pueden conservar a 4°C durante más de una semana con una degradación mínima y poca o ninguna pérdida de ARN viral. Además, la capacidad de utilizar muestras de saliva, que son tan sensibles o más fiables que los hisopos nasofaríngeos, ofrece una alternativa de muestra atractiva.

“La alta sensibilidad de nuestro protocolo puede ser útil para realizar pruebas a pacientes con títulos virales bajos, como pacientes asintomáticos o pruebas a individuos antes de la liberación de la cuarentena. Nuestro método también permite mezclar para análisis varias muestras de pacientes, lo que reduce la cantidad de pruebas necesarias para poblaciones más grandes”, dijo Massimo Caputi, Ph.D., autor principal y profesor de ciencias biomédicas en la Facultad de Medicina Schmidt de la FAU. “Además, las pruebas pueden ser realizadas fácilmente por cualquier laboratorio de investigación equipado con un equipo estándar mínimo. Dado que la saliva se puede utilizar como una fuente confiable de virus, las muestras pueden ser obtenidas por los propios pacientes e inactivadas en TRIzol, eliminando la necesidad de personal médico y protocolos e instalaciones de bioseguridad de alto nivel”.

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Universidad Atlántica de la Florida