Minitransposón artificial para crear biblioteca de expresión de mutación en proteínas

Un nuevo método eficaz para la producción de bibliotecas de la expresión de proteínas mutadas ofrece beneficios únicos para los estudios de estructura y función de las proteínas y la ingeniería de proteínas.

El minitransposón fue diseñado y utilizado específicamente, por inserción aleatoria mediante la enzima MuA transposasa, para crear una biblioteca de genes para expresar un conjunto de mutantes de proteínas que proporciona una diversidad de secuencias únicas de proteína con respecto a los métodos existentes.

Las bibliotecas que expresen mutantes múltiples de una proteína dada son particularmente útiles para estudiar mecanismos de proteínas y la adaptación de las proteínas durante la evolución molecular, así como para el diseño de proteínas (tales como biosensores e interruptores moleculares) con nuevas funciones en biología sintética, incluidas posibles enzimas para farmacoterapia.

Un tipo de biblioteca en uso se compone de mutantes de proteínas “mutadas circularmente”, proteínas que han sido mutadas mediante la conexión de los dos extremos (N- y C-terminal) y después rotas en otras partes, obteniendo a menudo también una(s) parte(s) alterada(s) en el medio.

El nuevo método, llamado PERmutación con Ingeniería de Transposasa (PERMUTE), para hacer este tipo de biblioteca, fue desarrollado por el estudiante de pregrado Manan Mehta y su mentor, Jonathan Silberg, profesor asistente en el Departamento de Bioquímica y Biología Celular de la Universidad Rice (Houston, TX, EUA), con la asistencia de la técnica de investigación y coautora, Shirley Liu.

“La creación de una biblioteca, como ésta, ha requerido tradicionalmente de cuidadosos procesos” dijo el profesor Silberg. Más...